4. Με τον όρο κλωνοποίηση εννοούμε: 5. Μια cDNA βιβλιοθήκη περιέχει … 7. Το διάγραμμα αναπαριστά μία γενετική διαδικασία. Ποια από τις παρακάτω προτάσεις αποδίδει σωστά το αποτέλεσμα της διαδικασίας αυτής;
8. Δίνονται παρακάτω οι αλληλουχίες βάσεων δύο τμημάτων DNA τα οποία βρίσκονται σε διαφορετικά πλασμίδια και περιέχουν γονίδια ανθεκτικότητας σε διαφορετικά αντιβιοτικά το καθένα, στα βακτήρια που ανήκουν. Τα πλασμίδια αυτά πρόκειται να κατεργαστούν με την περιοριστική ενδονουκλεάση EcoRI για την προσθήκη ξένου DNA και στη συνέχεια να μπουν σε βακτήρια E. coli τα οποία θα χρησιμοποιηθούν ως ξενιστές. Ανθεκτικότητα στο αντίστοιχο αντιβιοτικό προσφέρει στον ξενιστή του:Πλασμίδιο 1
3’–TTT TAC CTT AAG TCT TGC ACG CGC ACT GAG CCG GCA–5’
5’–AAA ATG GAA TTC AGA ACG TGC GCG TGA CTC GGC CGT–3’
Πλασμίδιο 2
3’–TTT GAC TTA AGA CAA TAC TCT TGC ACG CGC ATT GCA–5’
5’–AAA CTG AAT TCT GTT ATG AGA ACG TGC GCG TAA CGT–3’
9. Από ηπατικά και νευρικά κύτταρα ενός ποντικού απομονώθηκαν πυρήνες και επωάστηκαν με ραδιενεργά ριβονουκλεοτίδια. Τα διάφορα RNA που παρασκευάστηκαν με τη διαδικασία της μεταγραφής στους πυρήνες των κυττάρων αυτών ήταν επίσης ραδιενεργά. Από τα ηπατικά κύτταρα απομονώθηκε ένα mRNA που υπάρχει μόνο στα ηπατικά κύτταρα και το οποίο χρησιμοποιήθηκε ως μήτρα για την κατασκευή μονόκλωνου cDNA που μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως ανιχνευτής. Αυτά τα ραδιενεργά mRNA μόρια επωάστηκαν με μονόκλωνα τμήματα DNA και αφέθηκαν να δημιουργήσουν δίκλωνα υβριδικά μόρια. Στη συνέχεια με κατάλληλες μεθόδους απομακρύνονται όλα τα μη υβριδοποιημένα RNA μόρια. Τέλος μετρήθηκε η ραδιενέργεια των μορίων που απέμειναν και τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στον παρακάτω πίνακα (η μέτρηση της ραδιενέργειας γίνεται με κτύπους ανά λεπτό του μετρητή ραδιενέργειας):
Ποια από τις παρακάτω προτάσεις σχετικά με την αντιστοιχία του ανιχνευτή και του συγκεκριμένου ηπατικού mRNA υποστηρίζεται καλύτερα από τα δεδομένα του πίνακα; 10. Σας ενδιαφέρει με τη χρήση μοριακών τεχνικών κλωνοποίησης να απομονώσετε ένα συγκεκριμένο γονίδιο από ένα είδος καρχαρία. Το τμήμα DNA εισάγεται μέσα σε ένα πλασμίδιο, αλλά δεν παράγονται λειτουργικά αντίγραφα της αντίστοιχης συγκεκριμένης πρωτεΐνης όταν το πλασμίδιο χρησιμοποιείται για να μετασχηματίσει βακτηριακά κύτταρα. Ποια από τις παρακάτω εξηγήσεις θεωρείτε καλύτερη για το συγκεκριμένο φαινόμενο, αν δεν μεσολάβησε μετάλλαξη; 24. Ποιο από τα παρακάτω δίκλωνα μόρια DNA, που περιέχει μικρό γονίδιο, αφού κοπεί με κατάλληλο περιοριστικό ένζυμο μπορεί να αποτελέσει μέρος γονιδιωματικής βιβλιοθήκης; 29. Ένας ερευνητής κατασκευάζει τη γονιδιωματική βιβλιοθήκη του ζώου Parhyale hawaiensis (γαρίδα). Για την επιλογή των κλώνων που έχουν προσλάβει ανασυνδυασμένο πλασμίδιο χρησιμοποιεί την τεχνική της X-gal. Στο πλασμίδιο που χρησιμοποιεί υπάρχει το γονίδιο LacZ της β-γαλακτοσιδάσης, «εντός» του οποίου βρίσκεται το σημείο κοπής της EcoRI. Η β-γαλακτοσιδάση μετατρέπει τη λευκή ουσία του υποστρώματος X-gal σε μπλε, «βάφοντας» ολόκληρη την βακτηριακή αποικία. Ο ερευνητής προσθέτει στο θρεπτικό υλικό των βακτηριακών κλώνων τετρακυκλίνη και X-gal. Στο τρυβλίο του μετά από λίγες ημέρες έχει την κάτωθι εικόνα. Ποιες τελικά αποικίες θα επιλέξει για να φτιάξει τη γονιδιωματική του βιβλιοθήκη;
32. Η κλωνοποίηση είναι τεχνική που: 33. Δίνεται η μία από τις δύο αλυσίδες ενός τμήματος DNA που πρόκειται να κλωνοποιηθεί με PCR:\[3΄CTAATCTTGTCGGGTGGTCCCAT…..TATTGCAAAACTATGGCAGTTGCG 5΄ \]
Το κατάλληλο ζευγάρι πρωταρχικών τμημάτων που πρέπει να τοποθετηθεί στο δοκιμαστικό σωλήνα προκειμένου να γίνει η κλωνοποίηση, είναι:
37. Η μέθοδος της αλυσιδωτής αντίδρασης PCR μας επιτρέπει: 39. Οι περιοριστικές ενδονουκλεάσες προστατεύουν τα βακτήρια από την δράση των βακτηριοφάγων,τα γονιδιώματα των οποίων μπορούν να αποικοδομηθούν από τις περιοριστικές ενδονουκλεάσες. Τα βακτηριακά γονιδιώματα δεν είναι ευάλωτα σε αυτά τα περιοριστικά ένζυμα επειδή το βακτηριακό DNA μεθυλιώνεται. Υπάρχουν όμως βακτηριοφάγοι των οποίων τα γονιδιώματα είναι επίσης μεθυλιωμένα. Καθώς τα νέα στελέχη των ανθεκτικών βακτηριοφάγων αυξάνονται σε συχνότητα, ταυτόχρονα δημιουργούνται και βακτήρια των οποίων τα γονιδιώματα δεν είναι μεθυλιωμένα και των οποίων τα περιοριστικά ένζυμα αποικοδομούν το μεθυλιωμένο DNA. Κατά τη διάρκεια του εξελικτικού χρόνου, ποιο από τα παρακάτω νομίζετε ότι είναι περισσότερο πιθανό να συμβεί; 
